Teljes Belső Visszaverődéses Fluoreszcencia Mikroszkóp (TIRFM)

A teljes belső visszaverődéses fluoreszcencia mikroszkópia (total internal reflection fluorescence microscopy) sejtmembrán, membránközeli sejtorganellumok, fedőlemezre kitapadó minták sepcifikus, nagy érzékenységű vizsgálatára alkalmas módszer. A nagy NA-val rendelkező objektívből a gerjesztő fény a határszögnél nagyobb szögben érkezik az üveg-víz (fedőlemez-minta) határfelületre, így ott teljes visszaverődést szenved. A visszaverődés helyén megjelenő, exponenciálisan lecsengő ún. evaneszcens mező azonban a minta határfelületéhez közel eső rétegben lévő festékeket gerjesztheti (~100-200 nm mélységig), de a minta belsőbb rétegeibe nem jut el. Így pl. a sejtmembránból specifikus fluoreszcencia jelet kaphatunk igen alacsony háttér mellett. A módszer a konfokális mikroszkópiáét jelentősen meghaladó érzékenységgel rendelkezik felületvizsgálati alkalmazásokban (ligandkötődés, internalizáció, membránfehérjék és lipidek vizsgálata, stb.).

A mikroszkóp 4 lézerrel van ellátva (405, 491, 561, 647 nm). Az Andor iXon 897 EMCCD kamerával 20 ms-onként lehet képet rögzíteni. A mikroszkóp optikai osztóval van ellátva, melynek segítségével egyidejűleg lehet spektrálisan szeparált (pl. zöld és vörös) képeket felvenni a kamera CCD chipjének két felén. A kamera érzékenysége egyedi festékmolekulák detektálását is lehetővé teszi. A vizsgálati rétegvastagság (az evaneszcens mező behatolási mélysége) automatikusan beállítható a beesési szög változtatásával mindegyik lézervonal esetén.

A mikroszkóp alkalmas szuperfeloldású (~20 nm) képek készítésére fotoaktiválható festékek alkalmazásával, a PALM, STORM, dSTORM technikkal.

Kapcsolat

Dr. Vámosi György

E-mail:

Tel.: +36 52 412 623 +36 52 412 623 (titkárság), +36 52 411 717 +36 52 411 717 / 66369-es mellék (közvetlen)

Updated: 2018.07.10.


Dear User!

 

The University of Debrecen considers the protection of personal data and the information provided to be of paramount importance. We hereby inform you that the University of Debrecen has reviewed its processes and incorporated the requirements of GDPR into his own data management and data protection activities, which entered into force on may 25,2018. The personal data of the users has been carefully handled by the University of Debrecen, it complies with the applicable data management regulations.Following the requirements of GDPR, we updated our Privacy Statement, which you can access by clicking on the link below: Privacy Policy.